Transport Mode
Liquid Nitrogen Transportation
1、Adsorptive Liquid Nitrogen Transportation ,No free liquid nitrogen ,White vapor emission indicates normal operation.
2、Temperature monitoring devices should closely monitor the temperature inside the tank during transportation. If any abnormalities are detected, you can copy the PDF and Excel data from the temperature recorder. (One end of the temperature monitoring device can be unplugged to reveal a USB connector. Simply insert it into a computer to copy the data. If you encounter any difficulties, you can contact the sales staff and technical support for assistance.)
3、Alloy Combination Lock Designed to ensure no third-party access to the LN₂ tank or cell samples during transportation from dispatch to receipt, thereby safeguarding cell integrity.
4、GPS Tracker Enables real-time tracking of cell transportation routes to prevent loss.
5、Liquid Nitrogen Tank, temperature monitoring device, alloy combination lock, and GPS tracker are returnable components. Please store them properly and avoid damage; failure to comply will result in blacklisting.
Reference Citation
pass over.
Scope of Application
Drug Development: Drug metabolism.
Due to biannual updates of our product instruction manual, the following procedures are for reference only.
The most recent version included with the product shall prevail.
II 试剂与材料
Ø 猴原代肝细胞（Cat# LV-PMonH001/2）
Ø 复苏培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-Rec001）
Ø 纯化培养基（如需要，随细胞赠送）
Ø 铺板培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEP007）
Ø 维持培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEM007）
Ø 胶原包被板（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-Coated）
Ø William's Medium E（WE）培养基（悬浮肝细胞需要，客户自备）
Ø 非TC处理板（悬浮肝细胞需要，客户自备）
Ø 无菌15mL离心管
Ø 一次性移液管
Ø 宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）
Ø 移液枪
Ø 恒温水浴锅（37℃预热，请用温度计校准温度）
Ø 冷冻水平离心机（带水平转子，可离15mL离心管）
Ø 生物安全柜
Ø 37℃/5%CO2培养箱
Ø 75%酒精
重要提示：解冻时，冻存细胞转移必须使用液氮转移；在整个复苏实验过程中必须全程使用宽口枪头。
III 悬浮细胞的复苏
1. 生物安全柜中，将10mLWE培养基加入到15mL离心管中，37℃恒温水浴锅预热20分钟，然后转移到生物安全柜中待用；纯化培养基冰浴或4℃放置待用（如需要）；WE培养基37℃预热。
2. 将冻存的肝细胞从液氮中迅速转移至37℃恒温水浴锅中。将冻存管尽可能多的浸入水中（冻存管管 盖保持在液面以上），于水中顺时针大范围划圈。
3. 解冻冻存管约90 ~120ss，至冻存管中只有小块碎冰漂浮即可。
4. 用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至10mLWE培养基（注意：冻存管与枪头上残留细胞，可吸取1mLWE培养基润洗冻存管与枪头并将其混入离心管的培养基中），轻微上下颠倒离心管2-3次混匀。
6. 50g，常温离心5分钟。去上清，用WE培养基重悬，用台盼蓝排除法（V细胞悬液：V0.4%台盼蓝=9：1，细胞活率使用血球计数板手工计数，勿用细胞计数仪；细胞总数使用细胞计数仪计数）测定肝细胞的活力、细胞总数，建议细胞总数检测 3 次，求取平均值；为节约时间，细胞活率检测1次。根据客户实验要求确定铺板密度和药物浓度，如做悬浮细胞代谢功能测试，推荐铺12孔板或24孔板，铺板密度为1×106cells/ml，1ml/孔（参考团体标准T/CSCB0008-2021）。
7. 如果细胞活力低于70%，可利用纯化培养基去除死细胞：将细胞悬液离心，100g常温离心5分钟，去上清，用2mL纯化培养基（免费提供）重悬细胞，然后沿管壁向离心管小心加入1mLWE培养基（切勿扰动下层，加入后可见明显分层）；800g，4℃离心10分钟（升速为9，降速为1），离心后，吸取纯化培养基和WE培养基之间的浑浊带（活细胞层），转移到新的15mL离心管中，加入2倍体积的WE培养基；混匀后，50g，常温离心5分钟；去上清，用2mLWE培养基重悬细胞，后续计数及铺板同第6步骤。
