II 试剂与耗材
—胶原母液（本产品Cat: LV-collagen004）
—超纯水
—醋酸母液
—0.22μm滤膜及50mL一次性注射器
—氢氧化钠（Sigma； Cat：S5881-500G）
—移液枪及枪头
—培养板/皿/瓶
—生物安全柜
—37℃/5%CO2培养箱
III 包被步骤
1.在生物安全柜中，将5mL醋酸母液加入到1L无菌水中配制成为醋酸工作液。
2.加入I型猪皮胶原母液，使终浓度为50μg/mL，即每100mL醋酸工作液中加入5mg胶原蛋白（对应胶原母液体积为V=5mg/10mg/mL=0.5mL），4℃保存待用（不超过3个月）。
3.将胶原工作液以大于/等于5μg/cm2的包被量加入到需要包被处理的培养板/皿/瓶中，通常情况下，加入工作液为推荐培养基（见附表）使用体积的60%，如12孔板的培养基推荐使用体积为1mL，加入0.6mL胶原工作液即可达到饱和。
4.生物安全柜中，常温孵育1h。延长包被时间至3小时，对后续细胞培养没有影响。
5.将胶原工作液吸出，生物安全柜中自然晾干，封口膜封口，4℃保存不超过6个月。
6.接种细胞前，胶原包被培养板/皿/瓶需PBS或培养基清洗一次，以去除残留的醋酸。
IV 成胶步骤
1.准备1M NaOH、10×PBS或10×DMEM以及超纯水，过滤除菌后于冰上预冷。
2.成胶溶液的各成分添加量与配置方法：
2.1 10×PBS或10×DMEM的添加量为最终体积的1/10mL。
2.2 胶原添加量为：
终体积×胶原终浓度（mg/ml） | =胶原添加量（mL） |
胶原母液浓度（10mg/mL） |
2.3 NaOH添加量为：
胶原添加量×0.015μL=1M NaOH添加量（μL）
2.4 灭菌水的添加量：
终体积-胶原添加体积-NaOH添加体积-10×PBS或10×DMEM体积=超纯水添加量（mL）
3.将10×PBS或10×DMEM和NaOH溶液以及超纯水混合均匀至于冰上。
4.将胶原加入混合液中充分混匀，然后立即使用。
5.使用时可根据实验需求直接铺板，放入37℃孵育30min待胶凝固即可使用。
Ⅵ 参考文献
(1) Biofunctionalization of porcine-derived collagen matrices with platelet rich fibrin: influence on angiogenesis in vitro and in vivo[J]. Clinical Oral Investigations:1-12.
特殊说明
1.本产品为冷藏发货，收货后可能为部分液体或者液体状态（确保仍然低温），属于正常状态。
2.I型猪皮胶原母液储存在-20℃，避免多次冻融，建议根据需求量进行分装后冻存。
3.本产品为无菌液体，请放心使用，无需过滤。
4.胶原工作液可重复利用2-3次，但需避免因多次包被而造成可能的污染，如怀疑存在污染，请立即放弃使用。
5.成胶时只需把终溶液调成中性即可，添加NaOH的量可能会有误差，可和水的添加量进行调整。
6.各成分溶液添加混合顺序可互换，但是要保证不可将NaOH加入胶原溶液中，只可以将胶原溶液加到NaOH溶液中，避免出现因NaOH不能迅速混匀而产生局部凝胶的情况。
